无细胞蛋白表达试剂盒是一种用于在离体条件下合成蛋白质的工具,在科研和工业领域具有广泛应用。该试剂盒的核心原理是利用无细胞蛋白表达系统,在体外模拟细胞内的蛋白质合成过程。它通常包含细胞提取物、能量源、氨基酸、辅因子等必要组分,以及核酸模板(如质粒DNA、线性DNA或mRNA)。通过加入目标蛋白质的编码模板,试剂盒可以在短时间内实现高效的蛋白质合成。
无细胞蛋白表达试剂盒具有诸多优势。首先,它操作简便,只需加入模板、提取物和底物即可开始表达,像做PCR一样简单。其次,表达快速,通常只需2-4小时即可完成实验。再者,它具有高普适性,能突破传统细胞内表达的极限,实现大分子蛋白、毒蛋白、膜蛋白及不溶蛋白的表达,表达量可达3mg/ml反应体系。此外,试剂盒的自由度高,可根据需求添加蛋白酶抑制剂、稀有密码子、金属离子等添加剂,或进行tRNA修饰和氨基酸标记等,还能进行多个模板的同时表达,表达出的多个蛋白自动组装。
1、低温保存
大多数无细胞蛋白表达试剂盒需要低温保存,通常为-20℃或-80℃。
具体温度要求需参考试剂盒说明书,避免因温度过高导致蛋白或酶失活。
2、避免反复冻融
反复冻融会破坏试剂中的蛋白质、酶或核酸成分,导致活性下降。
建议将试剂分装成小份,仅取出一次实验所需的量,剩余部分继续保存。
3、干燥环境
保持试剂干燥,避免受潮或接触水分,防止微生物污染或成分降解。
4、避光保存
某些试剂(如荧光标记物或光敏成分)对光敏感,需用锡箔纸包裹或存放在暗处。