跑胶实操技巧：教你跑出清晰 “顺眼” 胶图

1.玻璃板清洁无残留

玻璃板需彻底清洗，杜绝蛋白、去污剂、油脂残留，否则易导致条带扭曲、出现笑脸纹；建议清洗后用乙醇冲洗一遍，晾干后再使用，提升电泳稳定性。

2.分离胶凝透再灌浓缩胶

分离胶未凝透就加样，会引发条带歪斜、分层模糊，常规需室温静置 30–40 分钟，确保胶体完全凝固。

3.配胶试剂现配现用

丙烯酰胺需避光储存，避免反复冻融；
APS、TEMED 必须临用前添加，加完后快速灌胶，试剂过期或失活会造成胶体偏软、条带跑不动。

4.按蛋白分子量选胶浓度

胶浓度与蛋白分子量不匹配，会出现条带拥挤、跑出胶外、分离不清等问题，精准配比参考：

• 大分子蛋白（>100 kDa）：8% 胶

• 中分子蛋白（30–100 kDa）：10% 胶

• 小分子蛋白（<30 kDa）：12%–15% 胶

注：使用预制胶时需核对生产日期与批号，发现质量问题及时更换。

1.控制上样量，避免浓度过高

上样量过大是条带拖尾、堆积、变形的主要原因，常规每孔上样总蛋白量建议 15–30 μg；若为纯目的蛋白，仅 1 μg 即可跑出清晰条带。

2.高温煮沸：充分但不过久

样品需 95–100℃煮沸 5 分钟

煮沸不足会导致蛋白未充分变性，条带形态怪异

煮沸过久则易造成蛋白降解，出现碎片条带

注：膜蛋白无需高温加热，高温易使其形成高聚体，影响电泳结果。

3.变性后离心，缺一不可

蛋白变性处理完成后，需 12000 rpm 离心 5 分钟；

不离心 → 沉淀进孔 → 条带脏、拖尾、有黑点。

4.保证 Loading buffer 新鲜

当 Loading buffer 出现变黄、产生沉淀等变质现象时，需立即更换，避免影响电泳效果。

1.加样枪操作轻柔，勿插太深

戳破胶底 → 条带直接跑偏、消失 → 白忙一场。

2.加满加样孔，空孔及时补液

加样时每孔尽量加满，空置孔需用 1×Loading buffer 填满；空孔不处理易引发条带向空孔扩散、歪斜。

3.稳定电泳电压，忌贪快

电压过高会使胶体发热，引发条带微笑、扭曲、弥散，需分阶段调节电压：

浓缩胶阶段：80V 恒压，直至条带被压成一条整齐细线

分离胶阶段：切换为 120V 恒压，稳定电泳

4.参照 Marker，把控电泳时长

以 Marker 条带为参照，待目标蛋白条带位置合适时停止电泳；小分子蛋白电泳切勿过度，防止条带跑出胶外。

（一）染脱仪染脱

适合粗纯样品的快速检测，出图速度快，可快速判定后续纯化方案；缺点是胶图背景不够干净，部分 SDS-PAGE 预制胶易出现洗脱不完全的情况（见图一）。

图1:洗脱不完全

（二）手动染脱

按规范操作：染色 15-20 分钟、脱色 15-25 分钟，预制胶需脱色 3-4 次，自制胶脱色 2-3 次，脱色次数不宜过多，否则会导致蛋白条带模糊；若洗脱后整胶仍偏蓝，可将胶体置于清水中静置，直至胶体清透。

优点是胶图背景相对干净，目的条带更清晰（见图2）；缺点是洗脱耗时较长。

图2:目的条带干净清晰、无杂带

注：预制胶电泳时，指示带必须跑到底，指示带位置会影响染脱效果，且跑到底后胶图条带排布更整齐美观。

图3: 指示带未到底

 图4:指示带到底