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抗体筛选是抗体药物开发中的关键一环。目前代表性的抗体筛选技术包括杂交瘤技术、转基因小鼠技术、噬菌体展示技术、核糖体展示技术、单B细胞筛选技术等。
利用合成抗体库以及从人或动物中分离单个B细胞克隆的抗体发现流程，在生成了候选抗体库之后，候选抗体的单独表达和评估却往往依赖于劳动密集型程序（例如基于质粒的克隆、转染、基于细胞的蛋白质表达、蛋白质纯化）。筛选过程需要数周至数月的时间，严重制约抗体筛选的速度和通量。
代表性抗体筛选技术
无细胞蛋白表达（CFPS）为候选抗体单独表达提供了一种新方式。该技术是一种无细胞膜限制、高开放性、高可控性的体外蛋白质生物合成技术。
无细胞表达抗体示意图
在抗体筛选方面，CFPS相比于细胞表达系统具有显著优势：
①无需耗时的基因克隆、转染、细胞培养流程，从线性DNA片段到候选抗体分子仅需数小时；
②可高通量、自动化合成抗体，可适配高通量移液工作站进行高通量、自动化抗体表达，更节省人力成本。
基于细胞表达系统与基于CFPS的抗体筛选对比
近日，珀罗汀生物携手玄刃科技成功建立高通量无细胞蛋白表达工作站，日筛抗体三千个，自动合成无人工！抗体筛选告别以周甚至月为周期，进入“天选"模式！
珀罗汀无细胞抗体筛选，允许以线性化DNA片段作为模板，数小时内表达候选抗体，产物可直接进行ELISA实验，无需纯化。另外，珀罗汀生物无细胞技术允许二硫键生成，既可表达VHH、scFv抗体分子片段，也可表达Fab、全长抗体，无抗体种类限制。
案例：利用CFPS从单B细胞中快速筛选单克隆抗体
该研究通过单B细胞建立抗体库，通过CFPS表达并评估mAbs，在2天内完成了抗原特异性mAbs的筛选。该方案包括从免疫兔的外周血中收集B细胞、通过抗原包被的磁珠和内质网(ER)染色选择B细胞、基于单细胞的PCR、在CFPS中生产mAb以及CFPS产物直接进行ELISA实验。
单B细胞+CFPS抗体筛选方案
参考文献：
[1] Lu RM, Hwang YC, Liu IJ, Lee CC, Tsai HZ, Li HJ, Wu HC. Development of therapeutic antibodies for the treatment of diseases. J Biomed Sci. 2020 Jan 2;27(1):1.
[2] Hunt AC, Vögeli B, Hassan AO, Guerrero L, Kightlinger W, Yoesep DJ, Krüger A, DeWinter M, Diamond MS, Karim AS, Jewett MC. A rapid cell-free expression and screening platform for antibody discovery. Nat Commun. 2023 Jul 3;14(1):3897.
[3] Ojima-Kato T, Nagai S, Nakano H. Ecobody technology: rapid monoclonal antibody screening method from single B cells using cell-free protein synthesis for antigen-binding fragment formation. Sci Rep. 2017 Oct 25;7(1):13979.
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